A549 （人非小细胞肺癌细胞）细胞培养常用设施和设备

　　A549 （人非小细胞肺癌细胞）细胞培养的常用设施设备：实验室设计：细胞培养是一种无菌操作技术，要求工作环境和条件必须不受微生物污染和其他有害因素影响。细胞培养室的设计原则是防止微生物污染和有害因素，工作环境要清洁，空气要新鲜、干燥、无烟、无尘。细胞培养室的设计原则一般是：无菌操作区位于房间的内侧，活动较少，常规操作和封闭培养在一个房间，而洗涤和消毒在另一个房间。
 

　　

　　A549 （人非小细胞肺癌细胞）细胞培养常用设施和设备。

　　

　　1、超净工作台：又称净化工作台，分为侧流式、直流式和外流式三类。

　　

　　2、无菌操作间：一般由换药室、缓冲室和操作室组成。操作室配有净化工作台、二氧化碳培养箱、离心机、倒置显微镜等。缓冲室可放置冰箱、冷藏箱、HAO消毒用的无菌物品等。

　　

　　3、操作室：普通孵化器、离心机、水浴锅、计时钟、普通天平及日常分析处理材料。

　　

　　4、清洗消毒室：烤箱、消毒锅、蒸馏水处理器、酸罐等。

　　

　　5、分析室：显微镜、电脑、打印机等。

　　

　　A549 （人非小细胞肺癌细胞）细胞低温保存的注意事项：细胞低温保存液要提前准备好，DMSO不能直接加入细胞悬液中；不同细胞的消化时间不同。以实际显微镜检查结果为准。当大部分细胞回缩变圆，少数细胞脱落时，可停止消化。消化时间不宜过长；应选择80%-90%左右的汇合度。细胞应在对数生长期时进行冷冻，以确保细胞在冷冻过程中处于良好状态。冷冻密度可根据细胞性质进行调整；冷冻细胞的储存温度应低于-130℃，不宜长期保持在-80℃。粘附细胞冷冻保存的操作步骤如下。从培养箱中取出待冻细胞；在显微镜下观察细胞状态并拍照；将酒精消毒后的培养瓶放入安全柜中；吸去多余的培养基，加入2~3ml（PBS缓冲液）湿润一次；加入1ml胰蛋白酶，在37℃下消化；消化约1分钟，在显微镜下观察细胞消化情况；消化完毕后，加入3ml*培养基，终止。将细胞悬液转入15ml离心管进行离心，以1000rpm/min（约200g）离心3-5min；吸去多余液体，向细胞沉淀物中加入适量冷冻液，轻轻吸打混合；按比例分别装入冷冻管；将HAO标签放入梯度冷冻箱；将冷冻箱放入-80℃，冷却一晚，然后移入液氮保存。贴壁细胞低温保存实验的准备工作：将15mL离心管、低温保存管、PBS缓冲液、移液器、电动移液器等物品提前放入生物安全柜，并经紫外线照射消毒30min；取出完整的细胞培养液、0。25%胰蛋白酶-0.02%EDTA、细胞冻存液等从4℃冰箱中取出，复温至室温备用；程序冷却箱复温至室温备用。